FITC標(biāo)記套裝 NobleRyder P1150
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FITC標(biāo)記套裝 NobleRyder P1150
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FITC標(biāo)記套裝
| 組成 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| FITC | 10mg | |
| DMSO | 10ml | RT |
| | 100ml | 2－ |
| | 1ml | 2－ |
| Sephadex G-25 | 100ml（約50%含量） | 2－ |
| 層析空柱（10ml） | 一套 | RT |
| 透析袋MD25（8000-14000） | | 2－ |
| 鐵夾（夾透析袋） | 兩支 | RT |
保存條件：FITC -20度保存，其他常溫保存。
產(chǎn)品說明：本套裝是將FITC標(biāo)記的常用試劑集合為一體而成。適合于蛋白等含有氨基物質(zhì)的標(biāo)記。特別是抗體的標(biāo)記。
如果待標(biāo)記物分子量太小（如小于5KD），可能并不適合用此套裝（主要是后期純化去除未標(biāo)記上的FITC，可選用透析袋）。
標(biāo)記原理：在高PH下FITC可蛋白等分子的氨基相連，形成共價健。
操作方法：
一， 標(biāo)記量的計算：FITC分子量為389.4。一般為FITC：待標(biāo)記物＝10：1左右。比如抗體IgG分子量一般為150－160KD。則1mg HRP可標(biāo)記抗體40mg之間。
二， 計算好各步反應(yīng)時間。作好開始標(biāo)記的準(zhǔn)備工作。因為標(biāo)記是在PH為9.5的條件下反應(yīng)，如果待標(biāo)記物本身鹽含量很低并且緩沖力差，如生理鹽水，可等二天再準(zhǔn)備。如果不確定，將
三， 如果樣品緩沖能力很?。ü腆w可用水溶解），加入1/20體積的
四， 準(zhǔn)備層析柱（使用方法見附錄）。
五， 在樣品準(zhǔn)備好的情況下，稱量2mg左右FITC（請不要一次稱量過小，稱量過小時，誤差會很大），加入1ml DMSO溶解。取適量溶解好的FITC，加入準(zhǔn)備好的樣品迅速混勻。避光常溫反應(yīng)兩小時或者
六， 加入1/20體積的
七， 過柱。請保證總?cè)芤后w積不超過總體積的1/5。比較理想的是在1/10。也就是10ml凝膠，zui多過柱1ml的標(biāo)記液（此步也可以改為透析。一般避光透析兩天左右，到?jīng)]有明顯黃色出來為止）。
附透析袋使用方法：
本透析袋已預(yù)處理過，用雙蒸水清洗后將水用適當(dāng)吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾，但如果鐵夾不夠用，下部可用細(xì)線或者其他的透析袋夾。
將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住，上面支開，加入待透析物，留一定量的空氣在頂上，并小心的折一折，用鐵夾夾住，輕輕的擠壓，如沒發(fā)現(xiàn)有液體流出，可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾，將透析袋吊在透析液中，補充透析液，使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。
分子篩柱使用方法：
取空柱，加入雙蒸水沖洗三次，找一合適的地方架好，下面收集廢液，將Sephadex G-25取出搖勻，輕輕的沿壁倒入柱中（用去尖移液器加入也可以），等液體流出少量時，不停的補加凝膠到一合適的體積。一般加到10ml左右。在上口留出1－2ml空間。灌完膠后，用三倍體積的雙蒸水沖洗（從上面加入，下面自動流出），再用合適的緩沖液沖洗三倍體積（如生理鹽水或者PBS等）。
當(dāng)zui后一次加緩沖液后，把柱上層弄平整。等上層溶液*流完，就可以加入待過柱的標(biāo)記液。用去尖吸頭小心的中空滴加，如果一次加不完，等流出少量后再加，一直加完。待標(biāo)記物*流干后，再加入少量約3－5滴緩沖液（如生理鹽水或者PBS等），流完再加，如此三次左右，接著就可以一次加入1－2ml緩沖液（如生理鹽水或者PBS等）。加到一定體積后，可以看到柱中黃色會分層。收集下層溶液，加入適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑等，定溶。備用。
用過的凝膠可以丟棄或者重復(fù)使用（如果重復(fù)使用，須用大量的緩沖液沖洗，待上層黃色*流走。折中的方法是小心的將上層黃色膠挖掉。流下層的回收）
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營的進口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。
FITC標(biāo)記套裝 NobleRyder P1150
