人外周血淋巴細(xì)胞分離液
用途:用于體外分離外周淋巴血細(xì)胞,也可以從其他來(lái)源中分離單核細(xì)胞,包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞。LSM® 是一種滅菌過(guò)濾溶液,每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克鈉胺。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。
人外周血淋巴細(xì)胞分離液用途:用于體外分離外周淋巴血細(xì)胞,也可以從其他來(lái)源中分離單核細(xì)胞,包括臍帶血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞。LSM® 是一種滅菌過(guò)濾溶液,每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克鈉胺。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。
使用說(shuō)明:
1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2. 無(wú)菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。
3. 混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2 ml 生理鹽水
4. 仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM(室溫)于15ml離心管中,在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5. 室溫下400g離心15-30分鐘,離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以再LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞,如上圖所示。
6. 吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7. 吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中,室溫離心10分鐘,離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻,例如160 - 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。
8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
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